mercoledì 16 settembre 2015

Kaiser Test

Reagenti del kit:

1) 0,5 ninidrina in 10mL di etanolo
2) 80g fenolo in 20 mL di etanolo
3) 0,4 ml di KCNaq 0,001 M in 20 mL di piridina



Si preleva con la spatola una punta di resina e metterla in una provetta, lavare in metanolo e decantare, aggiungere un paio di gocce di ciascun reagente del kit nell'ordine 1, 2 e 3.
mettere la provetta sulla piastra a 110°C per 3-4 minuti.
Se sono presenti ammine libere il test è positivo e diventa blu.
Per un micromole di ammina/ g di resina equivalente il test ha il 99,5% di efficienza.
N.B.: Ser,Arg e Asp non danno sempre il blu. La Pro avendo un'ammina secondaria assume una colorazione marrone; I resuidi N-terminali di Pro necessitano di un monitoraggio con il test del chloranil (2,3,5,6-tetracloro-1,4-benzochinone), esso reagisce con le ammine primarie e secondarie in presenza di acetone e acetaldeide rispettivamente assumendo il colore green-blue benzochinone.


Ricapitolando:
resina bianca-------- kaiser test negativo---- ammina protetta o assente
resina blu------------ kaiser test positiva----- ammina deprotetta o libera
resina celeste-------- kaiser test parzialmente positivo----ammina è parzialmente deprotetta



lunedì 14 settembre 2015

Fmoc D-Val: proteggere un amminoacido

  Sintesi Fmoc-D-Val

In un pallone vengono messi sotto agitazione in diossano e in una soluzione al 10% di Na2CO3 per solubilizzare la D-Val. In un altro pallone viene sciolta e lasciata in agitazione l'Fmoc-Cl in diossano. La soluzione di diossano Fmoc-Cl viene aggiunta goccia a goccia al pallone contenente la soluzione i D-Val precedentemente posto in un bagno di ghiaccio.